人可溶性E选择素(sE-selectin)ELISA Kit
作者:深圳市恒昊生物科技有限公司
什么是人可溶性E选择素(sE-selectin)
要理解试剂盒的作用,首先需要认识检测靶点:E选择素是表达于活化内皮细胞表面的黏附分子,主要功能是介导白细胞与内皮细胞的起始黏附,在炎症招募、免疫应答过程中发挥关键作用。当内皮细胞被炎性因子激活后,膜表面的E选择素会被蛋白酶水解切割,释放一部分可溶性的片段进入循环,这就是可溶性E选择素(sE-selectin)。
正常生理状态下,人体循环中sE-selectin含量较低;当出现炎症反应、内皮损伤、肿瘤侵袭等情况时,sE-selectin水平会显著升高,因此它也被作为反映内皮激活、炎症程度以及多种疾病进展的重要标志物。而ELISA试剂盒,可以精准定量检测样本中该指标的浓度,为研究和诊断提供数据支持。
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注意事项
为了保证检测结果的准确性和重复性,操作过程中需要注意以下事项:
(一)样本制备与保存
- 不同类型样本处理方式有差异:血清样本建议采集后静置30分钟待凝固,再离心分离血清,避免溶血——溶血会导致血红蛋白非特异性吸附,干扰吸光度检测,造成结果偏差;血浆样本建议使用EDTA或肝素抗凝,避免使用含叠氮钠的抗凝剂,叠氮钠会抑制辣根过氧化物酶的活性,导致显色失败。
- 样本收集后如果不能及时检测,需要分装后保存在-20℃或-80℃环境,避免反复冻融,反复冻融会导致蛋白降解,使检测结果偏低。
- 若样本中sE-selectin浓度超出试剂盒的检测上限,需要用试剂盒自带的样本稀释液适当稀释后再检测,再将结果乘以稀释倍数得到最终浓度。
(二)试剂准备与操作
- 试剂盒从冰箱取出后,需要平衡至室温(20-25℃)后再使用,尤其是底物液,温度不均会导致显色不均匀,影响结果重复性。
- 洗涤步骤是降低背景干扰的关键:洗涤时要保证每孔加满洗涤液,洗涤后要拍干孔内剩余液体,拍板时避免交叉污染;如果采用自动洗板机,要确认每孔洗涤剂量充足,避免未结合杂质残留导致背景偏高。
- 加样时要注意更换枪头,避免样本交叉污染;加样过程尽量快速,避免加样时间过长导致孵育时间不一致,整板加样完成后再统一计时孵育。
- 显色过程需要避光,TMB对光敏感,光照会导致非特异性显色,因此孵育显色时需要将酶标板放在避光处。
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