上海
在镇痛药物研发、疼痛机制研究中，小鼠福尔马林测痛实验是最经典、应用最广的炎症性疼痛动物模型
该实验操作简便、稳定性高，可区分急性痛与炎症性痛，能够评价药物外周及中枢镇痛效果，是疼痛药理研究的基础模型。下面为大家梳理标准化实操流程，避开常见实验误差。
一、实验原理
足底皮下注射福尔马林后，小鼠表现出典型双相疼痛行为。
Ⅰ 相（0‑5 min）属于急性神经源性疼痛，由福尔马林直接激活外周伤害感受器引起；
Ⅱ 相（10‑60 min）为炎症性疼痛，伴随局部组织水肿、炎症因子释放与中枢敏化，贴近临床炎性疼痛状态。
记录小鼠舔足、抬足、抖足累计时间，即可定量评价疼痛水平与药物镇痛作用。
Behaview Box小鼠运动疼痛表型分析系统，XR-XE301，上海欣软[注1]
二、实验材料与动物准备
- 实验动物：6‑8 周 SPF 级 C57BL/6 或昆明小鼠，体重 18‑22 g，雌雄分笼。适应性饲养 3 天，12h/12h 光暗循环，自由摄食饮水。实验前无需禁食，避免额外应激。
- 试剂器材：37% 福尔马林原液、生理盐水、透明观察箱（20cm×20cm×30cm）、微量注射器、秒表、录像设备。用生理盐水配制
5% 福尔马林工作液，现配现用。
三、标准化实验操作步骤
- 环境适应：小鼠单只放入观察箱适应 20 min，待活动平稳无躁动再开始实验，环境保持安静、恒温、避免强光刺激。
- 药物预处理（药物实验用）：按方案灌胃 / 腹腔给药，对照组给予等量溶媒，等待药物起效时间。
- 足底造模注射：轻柔固定小鼠，右侧后足足底皮下注射
20 μL 5% 福尔马林工作液，避开血管，注射后轻按针孔，防止药液渗漏。
- 行为观测记录：立即放回观察箱，连续录像 60 min。Ⅰ 相统计 0‑5 min，Ⅱ 相统计 10‑60 min；5‑10 min 为间歇期不统计。
观察指标：抬足、舔舐、抖动注射侧后足，记录各时相疼痛行为累计时长。 - 实验结束：小鼠安乐死，福尔马林废液按有毒废弃物处理，箱体用 75% 酒精擦拭消毒。
福尔马林浓度不要随意改动，浓度过高会造成足底组织坏死溃烂；浓度偏低则疼痛反应弱，组间差异出不来。小鼠常用 5%、20 μL。
抓取、注射动作要轻柔，应激会抑制 Ⅰ 相疼痛行为，造成数据虚低。
严格区分双相时间窗口，Ⅰ 相反映直接伤害刺激，Ⅱ 相反映炎症与中枢敏化，解读药效时两相要分开分析。
[1] Dubuisson D, Dennis S G. The formalin test: a quantitative study of the analgesic effects of morphine, meperidine, and brain stem stimulation in rats and cats[J]. Pain, 1977, 4(2):161‑174. [2] Rosland J H, Tjolsen A, Hole K. The formalin test in mice: effect of formalin concentration[J]. Pain, 1990, 42(2):235‑242. [3] Font J, Lopez‑Cano M, et al. Formalin Murine Model of Pain[J]. Bio‑Protocol, 2021, 7(23):e2628.
[注1] 小鼠运动疼痛表型分析系统
专门针对疼痛研究：
• 单侧肢体疼痛模型
• 神经性疼痛
• 镇痛药效评价
• 疼痛相关行为分析
示例模型：
• 单侧肢体疼痛
• 脊髓损伤
• 原发性震颤
• 脊髓性肌萎缩
• 骨科损伤
• EAE（实验性自身免疫
性脑脊髓炎）
• 神经退行性疾病模型
可定制模块：
• 3D 姿态重建
• 面部表情捕捉与评分
• 超声波发声捕捉
• 热/冷异常性疼痛测
试（加热/冷却玻璃）
• 光纤记录同步
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