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质粒DNA & siRNA转染实验的一点心得

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细胞转染实验广泛涉及医学、兽医学、细胞学、基因学等多个学科,而在转染实验中,转染试剂的选择至关重要。在我们实验室曾使用过的多款国内外转染试剂中,百代生物公司旗下Lipofect5000 Prime DNA/siRNA转染试剂和国际权威品牌赛默飞公司产品Lipofectamine 3000转染试剂相比于其它试剂而言,性能较为优越。与此同时,Lipofect5000 Prime与Lipo3000相比,转染性能可完全相媲美,并且细胞毒性更低,操作更加简便。

一、转染性能

转染性能是众多研究者在质粒DNA & siRNA转染实验中重点关注的一项。我们通过实验检测发现,在普通贴壁细胞中,Lipofect5000 Prime在siRNA转染和质粒转染方面所取得的转染效率与Lipo3000不相上下。例如,分别使用Lipofect5000 Prime和Lipo3000转染小核酸NC-FAM到宫颈腺癌细胞系-Hela细胞中,24小时后,荧光图结果显示转染阳性率均可达到90%以上(如下图a-b所示);两者分别在Hela细胞中进行质粒转染,转染阳性率也均可达80%以上,但Lipofect5000 Prime转染GFP质粒到Hela细胞后,细胞死亡率较小,而Lipo3000的细胞死亡率稍高。



此外,对于一些难转染的细胞如免疫细胞、神经细胞、胶质细胞、肿瘤细胞等,我们也对两款试剂的转染效果进行了比较。结果发现,Lipo3000在这些细胞中的转染效率大多在15%-30%,而Lipofect5000 Prime能达到50%-90%的转染阳性率,哪怕是像小鼠单核巨噬细胞白血病细胞系-RAW264.7这类最难攻克的免疫细胞,转染效率也能达到60%左右(如下图e所示),这说明Lipofect5000 Prime在难转染细胞中的转染性能要显著优于Lipo3000。



二、细胞毒性

转染试剂的成分与其细胞毒性息息相关,Lipofect5000 Prime是可降解的生物纳米材料,一方面,显著提升了生物安全性,另一方面,对细胞的危害较小,细胞死亡率仅在5%左右;而Lipo3000为一种阳离子脂质体,具有一定的细胞毒性,会对细胞造成一定损伤,细胞死亡率高达20%以上。可见前者的细胞毒性远低于后者,因此Lipofect5000 Prime可以有效转染原代细胞,而Lipo3000由于细胞毒性较大,无法有效对原代细胞进行转染。

三、操作简便性

采用Lipofect5000 Prime进行转染实验,不需要特殊的培养基,试剂盒内配有专业的Trans buffer,并且因为其细胞毒性小,细胞死亡率较低,在转染之后的4-6小时也无需换液;而采用Lipo3000需要购买特殊的Opti-MEM减血清培养基,并且由于其细胞毒性相对较大,细胞死亡率相对较高,因此在转染之后的4-6小时最好进行换液。

综合我们的使用体验来说,对于大多数易转染的细胞,Lipofect5000 Prime和Lipofectamine 3000试剂的转染性能都很优越;但对于一些较难进行转染的细胞来说,选择采用新型可降解生物纳米材料研发的Lipofect5000 Prime对细胞活力的影响更小、转染效率更高,此外,价格上也要显著低于lipo3000,为转染实验的高性价比之选!

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