江苏
三款主流试剂实测对比，科研人亲测最优解
原代细胞体外存活周期有限、增殖能力偏弱，且对外源核酸递送载体耐受性低，转染效率与细胞活性往往顾此失彼，这也使得原代细胞转染成为细胞实验中公认的技术难点。为了解决原代细胞siRNA转染难题，我们课题组对细胞转染的三款常用试剂（赛默飞Lipofectamine RNAiMAX、Lipo3000，以及百代生物RfectPMV2）进行了逐个测试，测试主要围绕转染效率、细胞毒性、操作便捷性、实验成本四个科研人最关心的核心维度展开，最终找出了最适用于原代细胞转染的试剂。今天把选型经验分享给各位同行，帮助大家少走弯路！
一、转染效率
三款试剂递送能力各有侧重，但适配性差距明显：RNAiMAX作为经典的siRNA专用试剂，在细胞系中有超强的稳定性，但用于像大鼠原代肝细胞，大鼠原代主动脉平滑肌细胞等原代细胞转染时，效率波动大，稳定性差，大大影响了实验进度；Lipo3000主打质粒DNA转染，转siRNA属于“跨行作业”，对于一些普通贴壁细胞株的siRNA转染尚且差强人意，用于原代细胞则更不理想，细胞死亡多，几乎无法得出有效的实验结果；而使用RfectPMV2进行一些原代细胞的siRNA转染时却出现了让人眼前一亮的实验结果，比如转大鼠原代主动脉平滑肌细胞，其24h转染阳性率可达到90%以上；转染原代大鼠肝细胞，通过RT-qPCR检测其SSB基因的沉默效率更是高达95%以上。
二、细胞毒性
细胞毒性是检验一款siRNA转染试剂是否适合进行原代细胞转染的关键指标，细胞死了，一切实验都是白费。测试过程中我们使用Lipo3000进行原代细胞转染后，细胞大面积死亡，死亡率达到30%40%，对实验数据造成严重干扰；使用RNAiMAX的细胞死亡率略低于Lipo3000，但也造成20%左右的细胞死亡，对后续实验结果带来干扰；但使用RfectPMV2进行原代细胞时，我们惊奇的发现，原代细胞死亡率大大下降，仅在5%左右。后续查阅资料发现，可能是由于Lipo3000与RNAiMAX试剂中的阳离子脂质体组分毒性偏大，对细胞造成影响，而RfectPMV2采用了可降解生物纳米材料，还搭配了原代细胞专用柔和配方，因此有效保障和维持转染后的细胞形态及增殖状态。
三、操作便捷性
操作步骤的便捷性与实验结果直接挂钩。操作越简单，操作误差越小，重复性也就越高：RNAiMAX和Lipo3000使用过程中需使用特殊的Opti-MEM减血清培养基，转染4-8小时后还需进行换液，步骤繁琐，稍不注意就出错；RfectPMV2则完全不挑培养基，使用常规完全培养基即可直接转染，转染后也无需进行换液，流程简单易操作，大幅提升实验重复性。
四、实验成本
对于许多课题组来说，实验成本直接影响着实验规划：Lipo3000折合每毫升约5800元，RNAiMAX每毫升更是高达9000元；而在同等甚至更优的实验效果下RfectPMV2每毫升仅需2160元，大幅削减了实验成本。
最终选型总结
综合转染效率、细胞毒性、操作便捷性、成本四大维度，百代生物RfectPMV2在原代细胞转染中完胜！稳定出色的转染效率，实现高效基因沉默效果；超低细胞毒性，最大程度保护原代细胞；极简操作步骤，让实验轻松进行；极致的性价比，大幅降低实验开销。如果你目前要进行原代细胞siRNA转染，这款国产试剂真的可以闭眼冲！
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