浙江
病毒表面蛋白常以三聚体形式参与膜融合和免疫识别，维持生理性三聚化并提高重组蛋白产量是结构疫苗学与治疗性蛋白工程中的持续难题。2026年9月24日，厦门大学袁权/张雅丽/夏宁邵团队完成题为《Reoviridae-derived short trimerization domain for stabilizing homo-trimerization of vaccine immunogens and therapeutic proteins》的研究，他们从呼肠孤病毒σ1蛋白N端开发短三聚化标签rFd1303，用于稳定疫苗免疫原和治疗性蛋白的同源三聚化，并构建三聚体ACE2-Ig，在细胞和小鼠、仓鼠模型中评价其产量、稳定性、免疫原性、广谱中和与抗病毒效果。
研究团队比较轮状病毒VP4和呼肠孤病毒σ1的多个亚结构域，发现rFd3融合的SARS-CoV-2 S-ECD在CHO细胞中产量最高，截短后得到42个氨基酸的rFd13，并通过R40I等替换获得rFd1303。rFd1303融合的S-ECD三聚体稳定性提高，Tm1比rFd13和T4Fd高1.5°C，定量ELISA显示其产量比S-T4Fd提高约2.3倍。该标签用于流感HA、RSV F、ACE2、狂犬病毒G、辛德毕斯病毒E2、拉沙病毒G和BA.5 S时，产量比T4Fd提高1.4至4.8倍，HPIV3 F产量与T4Fd相近。SEC-MALS和冷冻电镜显示H1-rFd1303形成三聚体，H1-GCN4出现明显聚集，H1-rFd1303的2D分类中约41%粒子属于三聚体类，H1-GCN4仅约7%。
研究团队把rFd1303融合到ACE2-Ig的C端，引入H34SL突变消除ACE2锌金属酶活性，得到TriACE2-Ig并在CHO细胞中生产纯化。SDS-PAGE显示还原后条带在130至80 kDa，SEC-HPLC表观分子量大于669 kDa，SV-AUC主峰16.053 S对应约787 kDa，与三聚体ACE2-Ig预期质量相符。冷冻电镜2D分类中三聚体占64.1%，四聚体占12.9%，六聚体占11.8%，八聚体占1.6%。SPR检测显示TriACE2-Ig对WT、BA.5和XBB.1.5刺突蛋白的KD分别为1.58、0.31和0.40 nM，25°C存放30天后SEC和SPR特征与新鲜样品接近。
假病毒中和试验覆盖22种病毒，TriACE2-Ig平均IC50为3.2 ng/mL，比ACE2-Ig低18.1倍，比HexaACE2-Ig低1.4倍，对19种SARS-CoV-2变异株、SARS-CoV及穿山甲GD和GX冠状病毒均有中和活性。仓鼠Beta致死模型中，24、48和72小时感染后单次鼻内给予TriACE2-Ig，存活率分别为100%、83.3%和66.7%，体重损失和肺组织炎症面积低于对照组。Delta和XBB感染模型中，TriACE2-Ig降低肺、鼻甲和气管病毒RNA载量，并减轻肺损伤。XBB气溶胶传播模型中，TriACE2-Ig处理供体后共居的哨兵仓鼠体重损失、病毒RNA和肺部炎症均减少。
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