想要更快更简单的进行RNA逆转录与荧光定量,可舍弃两步法改用一步法进行实验,即将RNA逆转录和荧光定量在同一反应管内一步完成,更加简便高效,新手也极易上手。不仅如此,一步法荧光定量还具备多种优势,可细分为以下三个方面哦:
1、适合对荧光定量检测灵敏度要求较高的实验。
有的基因在样本中含量较少或丰度较低,用两步法往往检测不到或出现CT值过高的情况,导致阳性很弱,实验数据不可靠,而一步法中的逆转录产物会都用于后续荧光定量,因此灵敏度较两步法要高出许多,研究显示灵敏度可高出10倍,非常适用于低丰度目的基因的荧光定量检测。
2、适合要对大量样品进行分析或定量PCR的实验。
一步法中逆转录和荧光定量会在一个反应管中完成,实验过程中可省略cDNA与qPCR反应之间体系转换的过程,操作更加简便,因此非常适用于高通量扩增/筛选实验,并且对于新手来说,一步法也比两步法更易上手掌握。
3、适合对防污染要求较高的实验。
研究者在进行一些诊断试剂、检测试剂等相关产品的开发或研究过程中,又或是在污染源较多的实验室中进行试验,常常会对实验各个环节的防污染要求和结果的精确度要求都比较高,而一步法中逆转录和qPCR之间无开管和移液动作,因此可将污染风险降到最低。
下面是我们实验室使用BIOG的BIOGHCElitefast SYBR One Step Kit进行实验测试的数据,小伙伴们可以了解一下哦~
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