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样本切多厚、panel 怎么选?空间原位实验难点一次解答(附实战手册)

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当你拿到宝贵的组织切片,准备开展一次空间原位实验时,脑海中是否盘旋着这些实际问题:样本该切多厚?新鲜冷冻和石蜡包埋的流程有何不同?几百个基因的 panel 该如何设计?数据量巨大,又从哪里看起?

对于任何计划将单细胞数据升级到空间维度的研究者来说,这些实操细节,远比「样本是否稀有」更令人却步。 无论你的样本是穿刺得来的一小块,还是常规手术标本,一份清晰的「实战手册」,往往比理论讲解更能让你安心地迈出第一步。

Xenium 空间原位技术可以丝滑破局这些问题:一张切片可同时解析数千个基因、蛋白和形态学,帮你从实验规划到肿瘤微环境免疫亚群、阿尔茨海默病病理分析一步到位。想让您的单细胞数据无缝跃升至空间原位层面?我们为您整理了【Xenium 空间原位技术实战手册】(包含实验规划指南、样本制备避坑及前沿研究案例等),扫码下方二维码,即可免费领取。




精彩内容抢先看


1

实验规划第一步:八个核心问题助您理清思路

在正式开展空间原位分析前,先问自己这 8 个问题,能帮你少走几个月弯路:我想回答什么科学问题?需要哪些设备或经验?样本该如何保存、切片、放置?如何选择靶点?细胞分割怎么实现?数据怎么分析和可视化?存储空间够不够?——在资料包中针对这些问题都逐一给出了答案。

2

样本制备避坑指南:新鲜冷冻与 FFPE 的切片厚度、温度及放置技巧

新鲜冷冻样本:推荐切片厚度 10 μm,刀片温度 -20℃、样本头温度 -10℃。长时间切片时,建议短暂关闭冷冻室以使温度平衡。

FFPE 样本:推荐切片厚度 5 μm,水浴温度 42℃。首次运行前建议使用非实验组织块进行 HE 染色练习,并优化切片参数。

组织放置:Xenium 载玻片样本区约 236 mm2,切片之间不重叠即可。制备好的载玻片可储存长达两个月,无需当日立即上机。

3

四种靶点选择路径,适配不同研究需求

预设计基因组合:针对特定生物靶点,采用数据驱动策略设计,可直接使用。

附加定制:在预设计组合基础上添加最多 100 个自定义基因。

完全定制:针对大多数具有完备转录组注释的物种,设计多达 480 个基因。

蛋白质亚组合:可同时检测 23 种蛋白质及 4 种细胞分割标志物,实现 RNA 与蛋白同片共检。

4

细胞分割的多模态算法:三步定边界

Xenium 机载软件自动完成细胞分割:第一步直接推断细胞边界,可区分 0 个、1 个或多个细胞核;第二步对有单个细胞核的细胞进行内部分割;第三步对缺失边界或内部染色的细胞进行细胞核扩展,扩展距离为 5 μm(或直至遇到另一个细胞的边界)。每个细胞的转录本分配清晰可追溯。

5

数据分析和可视化工具

运行结束时即可获得可解读的数据,无需额外等待。免费桌面软件Xenium Explorer支持任意缩放、平移及单条转录本的可视化。数据以开放格式输出,亦支持第三方工具进行深度扩展分析。

6

实战案例速览(资源包内附完整报告)

肿瘤微环境:利用 380 基因的 Xenium 人类免疫肿瘤学组合,在卵巢癌、肺癌、胰腺癌和脑癌样本中精准区分癌细胞、免疫细胞与基质细胞,识别 T 细胞耗竭、三级淋巴结构及胶质母细胞瘤假栅栏结构。

阿尔茨海默病模型:采用定制 347 基因的小鼠大脑组合,定位 Aβ 斑块周围 50 μm 内活化胶质细胞的富集及多种斑块诱导基因(PIG)的上调,空间分辨率达到亚细胞水平。

内容策划:王丹琦

内容审核:朱卿

题图来源:图虫创意

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