既然设了溶媒对照，毒理试验还要加“空白对照”吗？

前言

做非临床毒性试验设计时，你有没有纠结过这个问题：既然已经设了溶媒（辅料）对照组，到底还需不需要再加一个空白对照组（Blank Control）？

最近我在设计一个复方药物的给药组别时，刚好碰到了这个问题儿。顺藤摸瓜查阅了不少国内外指导原则和文献，今天就和各位毒理圈的同行们盘一盘这个“看似基础、实则有料”的试验设计点。

指导原则怎么说

我们先来看看国内外权威机构（CDE与ICH）对空白对照的官方态度：

1. CDE的相关要求

《药物重复给药毒性试验技术指导原则》：

给药剂量原则上至少应设低、中、高3个剂量组，以及1个溶媒（或辅料）对照组，必要时设立空白对照组和/或阳性对照组。

《药物生殖毒性研究技术指导原则》：

当赋形剂可能产生作用或影响受试物的作用时，应另设空白对照组。

2. ICH的相关要求

在ICH指导原则中，逻辑基本与国内一致：主要是在生殖毒性和遗传毒性试验中提及——当赋形剂（溶媒）本身可能产生生物学作用，或可能干扰受试物的毒性表达时，应当增设空白对照组。

需要加设“空白对照”的情况

结合文献报道与行业临床前评价的实践经验，笔者认为，当遇到以下4种“高风险”情景时，单靠一个溶媒对照组是很难说清毒性来源的，必须果断加设空白对照组：

一、 高应激或有创的给药途径

当给药操作本身会对动物造成较强的物理刺激、心理应激或机械性损伤时，必须设置空白对照组（或假手术组 Sham Control），用以排除操作带来的干扰：

1. 吸入毒性试验：动物在动式或静式吸入染毒柜中需要经受长时间的束缚（如鼻暴露管），这会导致强烈的束缚应激（如体温异常、皮质酮水平激增）。此时必须设置空气空白对照组与溶媒对照组，以准确评估束缚应激本身对肺部及全身指标的影响。

2. 经特殊路径的有创给药：如玻璃体腔注射、蛛网膜下腔/脑室内注射、关节腔注射等。机械穿刺本身就可能引起局部炎症、眼压或脑压的剧烈波动。空白对照（或仅穿刺不给药）能帮你牢牢界定物理损伤的基线。

3. 持续静脉输注：通过手术植入埋藏式导管并佩戴转头装置的试验。手术创伤、导管对血管壁的机械摩擦、长期束缚都会引发动物生理变化，此时必须设置未手术的空白对照或假手术对照。

二、制剂等比例放大给药时

在非临床安全性评价中，当制剂中API 的浓度固定，而试验又需要提高动物的暴露量时，通常需要将全配方制剂粉末直接研磨、悬浮后对动物进行灌胃。

这意味着，在高剂量组中，API 放大了几十倍的同时，辅料的总输入量也同步飙升了几十倍。在此情况下，某些辅料（如甘露醇、矫味剂等）的动物暴露量会远超临床拟用量，极易引发动物的生理性或物理性副反应（如渗透性腹泻、胃肠道机械刺激等）。

此时，增设辅料（或基质/溶媒）对照组就显得尤为关键。它可以帮助我们准确甄别这些胃肠道反应究竟是由 API 本身的毒性引起的，还是高浓度辅料带来的物理或渗透压刺激所致，从而有效避免将辅料的干扰“误判”为药物本身的毒性。

三、溶媒/特殊辅料自身具有明确的生物学或生理学活性

当配方中使用的溶媒或助溶剂并非“完全惰性”，且在高剂量下可能干扰毒性靶器官的判断时：

1. 易引发组胺释放或超敏反应的溶媒：例如高浓度的吐温-80（Tween-80）、乳膏（Cremophor EL）、复合环糊精等。在犬或大鼠试验中，这类辅料极易引起一过性的血压下降、皮肤红肿等类过敏反应。增设空白对照可以铁证如山地证明：这些反应完全由溶媒引起，而非API（活性成分）导致。

2. 改变代谢酶或外排泵活性的溶媒：如高浓度的DMSO（二甲基亚砜）、PEG400、丙二醇等。它们可能对肝脏CYP450酶有诱导或抑制作用。空白对照有助于评估溶媒本身是否对动物的正常生化代谢背景造成了“漂移”。

四、特殊毒性终点与敏感指标的评价

某些对环境、情绪、生理波动极度敏感的试验终点，需要空白对照来确证“动物的基线生理状态”：

1. 免疫毒性与免疫原性试验：部分新型辅料（如脂质纳米粒 LNP、特定聚合物）本身具有佐剂效应，可能激活补体或刺激淋巴细胞增殖。增设空白对照可以建立起真正的免疫学阴性背景。

2. 生殖毒性试验：在胚胎-胎仔发育（EFD）试验中，母体动物的摄食量和体重的微小波动，都可能直接引发胎仔吸收胎增加或骨骼发育迟缓。空白对照能帮助申报者确证：溶媒本身未对母体生育力及子代发育造成隐匿性影响。

常用药用辅料在哪查

如果您在配制给药样品时，各剂量组和辅料对照组中的辅料浓度是恒定且在安全范围内的，或者这些辅料在您实验室有极其丰富的历史对照数据，此时不需要设置空白对照组。

在做非临床安全性评价时，摸清辅料的底细是基本功。推荐3个毒理人必备的权威查询药用辅料“兵器库”：

兵器一：国内便捷通道 —— “药物在线”辅料库

网址：www.drugfuture.com/excipients/

亮点：该数据库收载了《Handbook of Pharmaceutical Excipients》（药用辅料手册）这本行业公认的权威专著内容。只需输入辅料的英文名称，即可直接下载相关专论的PDF，极方便查阅其理化性质与基础安全性资料。

兵器二：出海申报核心依据 —— FDA 每日非活性成分数据库（IID）

网址：

https://www.accessdata.fda.gov/scripts/cder/iig/index.cfm

亮点：由美国FDA官方提供，按季度更新。通过辅料英文名（如 Hydroxypropyl Cellulose）检索，能直接查到该辅料在特定给药途径（如 Oral / Tablet 或 Oral / Capsule）下，已被FDA批准上市过的最大单次剂量（Maximum Potency）或每日最大给药量（Maximum Daily Intake）。这是做辅料安全性桥接最硬核的依据。

兵器三：本土合规风向标 —— 《中国药典》& CDE药用辅料登记数据库

亮点：用于检索该辅料在国内的登记状态（C-在审评，I-不激活，A-已激活）。结合《中国药典》（ChP）四部收载的辅料通则，能直接查明该辅料是否已被国内官方认可，规避合规风险。

在你们的研究中，一般在什么情况下会去加设空白对照组？

欢迎在评论区留言，我们一起讨论！

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