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组织细胞RNA提取实验心得

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在分子生物学实验中,RNA提取是最基础却也是最关键的步骤之一,肝脏、大脑、心脏、肾脏、肺等是研究中最常使用的组织,而各种培养的细胞系(如HeLa、293T细胞等)则是使用最广泛的细胞样本。在我们实验室曾用过的多款国内外核酸提取试剂中,上海星启百代公司的Starvio组织细胞RNA提取试剂和国外知名品牌QIAGEN的RNeasy系列试剂的核酸提取得率都较为优越。从使用体验上来说,Starvio组织细胞RNA提取试剂与RNeasy系列试剂相比,不相上下,并且在核酸得率、纯度等方面展现出令人信服的实力。

一、核酸得率

核酸得率是组织细胞RNA提取实验中一项非常关键的指标。Starvio的专利裂解液配方能够快速穿透组织细胞膜,彻底裂解组织细胞,使其RNA充分释放,显著提升RNA提取得率。与此同时,Starvio采用了自主研发的化学修饰离子膜,通过对膜表面进行化学基团修饰,使其对RNA的吸附能力显著增强。我们通过实验发现,在小鼠肝脏中,在同等样本量的前提下,Starvio组织细胞提取试剂的RNA提取得率相较于国内其它产品高出约20%左右。QIAGEN RNeasy系列试剂采用的是经典的硅胶膜技术,通过高盐缓冲液使RNA结合到硅胶膜上,再经洗涤液洗脱获得纯化的RNA,这一技术虽然成熟稳定,但是硅胶膜的核酸结合能力存在一定上限。例如,2×106个Hela细胞经40µl洗涤液洗脱,使用QIAGEN的RNA得率为60µg,使用Starvio的RNA得率为66µg,这说明Starvio在核酸得率上优于QIAGEN。

二、核酸纯度

核酸纯度是RNA提取实验中另一关键指标,同时也是保障后续酶学反应实验的核心要求。经过我们实验检测发现,采用Starvio和QIAGEN所得到的核酸纯度都很高。QIAGEN的裂解液(如RLT或QIAzol)配合蛋白酶K或DNase处理,可有效去除蛋白和DNA污染。Starvio试剂盒中的复合消化液可彻底消化样本中的蛋白质,同时试剂盒内还含有添加了高效去污因子的洗涤液,可最大程度地去除蛋白、色素、脂类和杂质污染等,两者相互协作确保了RNA的提取纯度。经检测,两款试剂提取到的RNA OD260/OD280比值稳定在1.8–2.0之间,无抑制剂残留,可以直接应用于Northern杂交、RT-PCR、Real Time RT-PCR、cDNA文库构建和体外翻译等各种分子生物学实验,并可确保获得高纯度的RNA。

总而言之,Starvio组织细胞RNA提取试剂和QIAGEN的RNeasy系列试剂两者的提取性能都很不错,但Starvio组织细胞RNA提取试剂在核酸得率上稍高。在价格上,由于QIAGEN是进口品牌,价格偏高,更适合经费充足的研究者;而Starvio价格实惠,性价比更高,即使试剂用量大也不用太担心经费问题,更适合大多数实验室和科研机构所选择!



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