浙江
慢性肾脏病患者常出现血管钙化，心血管并发症与死亡风险升高密切相关，非编码基因组来源微肽在其中的作用仍不清楚。2026年9月12日，浙江大学杨毅/林伟强/应颂敏团队完成题为《PKM2 AP: a micropedite inhibits vascular calcification via molecular glue-mediated ubiquitination of PKM2》的研究，他们通过透析患者动脉组织转录组分析、开放阅读框预测和翻译验证，发现LINC01139的ORF2编码一个40氨基酸微肽PKM2 AP，并在细胞与小鼠模型中评估其抑制血管钙化的作用和机制。
研究团队在患者动脉组织中发现，LINC01139的ORF2位于内含子保留转录本中，其ATG起始密码子能够驱动Flag和GFP报告蛋白表达，突变后信号消失。他们制备了特异性抗体，并在人主动脉血管平滑肌细胞中检测到内源PKM2 AP，其水平在β-甘油磷酸诱导早期升高，随后随钙化进展下降。亚细胞分级和共聚焦成像显示，PKM2 AP分布于细胞质和线粒体，外源Cy5标记肽可在1小时内进入细胞，约4小时与线粒体标志物共定位。功能实验里，siRNA敲低ORF2加重钙沉积和碱性磷酸酶活性，稳定过表达或外源补充合成肽则降低RUNX2、BMP2、钙沉积和ALP活性，并改善线粒体ATP、ROS、膜电位和嵴结构。
研究团队用IP-MS和Co-IP发现，PKM2 AP与PKM2直接结合，并命名为PKM2关联微肽。PKM2 AP不影响PKM2 mRNA，却降低PKM2蛋白，MG132处理可阻断该降低，敲低ORF2则提高PKM2稳定性，表明其经泛素-蛋白酶体途径降解PKM2。分子对接和动力学模拟显示，PKM2 AP可结合PKM2与STUB1，并位于二者界面附近，使PKM2-STUB1结合更稳定；SPR检测中，加入PKM2 AP后KD由7.39×10^-7 M降至2.48×10^-7 M。Co-IP和泛素化实验进一步显示，PKM2 AP促进STUB1与PKM2结合，增强K48连接多泛素化，主要修饰位点为PKM2 Lys136，STUB1敲低则削弱该过程。
细胞代谢分析显示，PKM2 AP降低细胞外酸化率和糖酵解质子外排率，减少乳酸生成，抑制有氧糖酵解。小鼠实验中，尾静脉注射PKM2 AP可到达主动脉组织，1,25(OH)2VitD3诱导的血管钙化、钙含量、RUNX2和BMP2表达均降低。H11-ORF2敲入小鼠在CAG-Cre驱动下表达ORF2-Flag，主动脉钙化同样减轻，成骨标志物下降。研究还通过临床动脉样本观察到，PKM2 AP在早期钙化组织中升高，与血管钙化早期调控相关。团队提出PKM2 AP作为分子胶，招募STUB1到PKM2并促进其降解，抑制糖酵解和乳酸积累，为血管钙化治疗提供候选策略。
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